TMT（Tandem Mass Tag）技术由美国Thermo Fisher Scientific开发的一种多肽体外标记技术。该技术采用了6标(TMTsixplex™ Isobaric Label Reagent Set）、10标(TMT10plex™ Isobaric Label Reagent Set ）、16标（TMTpro 16plex）、18标（TMTpro 18plex）等同位素标签，通过与肽段特异氨基酸位点相连实现不同来源的肽段标记，然后进行串联质谱分析，监测碎裂下来的标签实现肽段定量。一次实验可灵活比较最多18种不同样本中蛋白质的相对含量。
TMT试剂主要由3部分组成：报告基团、平衡基团和肽反应基团。以6标试剂为例：报告基团相对分子质量分别为126、127、128、129、130和131；平衡基团相对分子质量分别为103、102、101、100、99和98，这样就形成了6种相对分子质量均为229的等量异位标签。报告离子的强度就代表了相应样品中蛋白质/肽段的强度，实现了对不同样本中蛋白质的定性和定量分析。
技术优势
1. 灵敏度高：低丰度蛋白也能检测出
2. 适用范围广：几乎可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定
3. 高通量：能同时对18组样本中包含的蛋白进行鉴定及表达差异分析
4. 高效：液相色谱与串联质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好
样本起始量与送样建议
|
样本类型 |
起始量 |
|
动物及临床脏器组织/脑组织等 |
>20mg |
|
动物及临床皮肤/骨/血管/脂肪组织等 |
>100mg |
|
植物叶片组织/花 |
>200mg |
|
植物根/茎/果实/种子 |
>500mg |
|
原代细胞/细胞系 |
>5×106个 |
|
总RNA |
>100μg |
注意事项：详细样本准备指南，请联系在线客服。
生物信息学分析内容
项目文章
Luo Z, Peng W, Xu Y, Xie Y, Liu Y, Lu H, Cao Y, Hu J. Exosomal OTULIN from M2 macrophages promotes the recovery of spinal cord injuries via stimulating Wnt/β-catenin pathway-mediated vascular regeneration. Acta Biomater. 2021 Dec;136:519-532. PMID: 34551329.
常见问题
1. iTRAQ及TMT等标记定量蛋白质组技术有什么特点？
iTRAQ以及TMT等标记定量蛋白质组技术分辨率高，细胞样品最多可鉴定超过6000个蛋白，并且绝大多数蛋白都有定量和定性信息；其次是通量高，可以一次最多完成8个（iTRAQ）或者10个（TMT）样品的实验，特别适合于多组样品间的同时比较以及生物学过程的动态检测。
2. 没有全基因组数据的物种该如何进行蛋白的鉴定？
对于已经公布全基因组序列的物种，可以在得到全序列后构建本地建库并进行本地检索；对于未进行全基因组测序的物种，可以采用近缘物种的数据库或者EST数据以及转录组数据进行检索。
